4-nitrofenil-beta-D-galaktopiranozidas CAS: 200422-18-0

Poveikis: ONPG yra substratas, specialiai naudojamas fermento β-galaktozidazės buvimui ir aktyvumui nustatyti. Kai β-galaktozidazės fermentas yra ir yra aktyvus, jis skaido ONPG į du produktus: o-nitrofenolą ir galaktozės darinį. Išsiskyręs o-nitrofenolis, pasikeičia spalva, kurią galima išmatuoti spektrofotometru.

Taikymas: ONPG turi keletą pritaikymų molekulinės biologijos ir biochemijos tyrimuose:

β-galaktozidazės aktyvumo nustatymas: ONPG dažniausiai naudojamas β-galaktozidazės fermento aktyvumui matuoti ir kiekybiškai įvertinti. o-nitrofenolio susidarymo greitis, kuris yra tiesiogiai proporcingas fermento aktyvumui, gali būti matuojamas spektrofotometriškai.

Genų raiška ir reguliavimas: ONPG dažnai naudojamas eksperimentuose, susijusiuose su genų raiškos ir reguliacijos tyrimais. Jis dažnai naudojamas susiliejusių baltymų tyrimuose, tokiuose kaip dažniausiai naudojama lacZ susiliejimo sistema, siekiant tirti genų raišką, kontroliuojamą specifinių promotorių. Beta-galaktozidazės aktyvumas, išmatuotas naudojant ONPG, suteikia įžvalgų apie genų raiškos lygį.

β-galaktozidazės aktyvumo patikra: ONPG gali būti naudojamas kaip kolorimetrinis patikros metodas rekombinantinėje DNR technologijoje, siekiant nustatyti LacZ geno, koduojančio β-galaktozidazę, buvimą ir funkcionalumą. Šis patikros metodas padeda identifikuoti klonus, kuriuose yra dominantis genas.

Fermentų kinetikos tyrimai: ONPG taip pat naudingas tiriant β-galaktozidazės fermento kinetiką. Matuojant fermento ir substrato reakcijos greitį esant skirtingoms substrato koncentracijoms, galima nustatyti kinetinius parametrus, tokius kaip Michaelis-Menten konstantos (Km) ir maksimalus reakcijos greitis (Vmax).