4-nitrofenilo beta-D-galaktopiranozidas CAS:200422-18-0

Poveikis: ONPG yra substratas, specialiai naudojamas fermento β-galaktozidazės buvimui ir aktyvumui nustatyti.Kai β-galaktozidazės fermentas yra aktyvus, jis suskaido ONPG į du produktus: o-nitrofenolį ir galaktozės darinį.Dėl o-nitrofenolio išsiskyrimo pasikeičia geltona spalva, kurią galima išmatuoti naudojant spektrofotometrą.

Taikymas: ONPG turi keletą pritaikymų molekulinės biologijos ir biochemijos tyrimuose:

β-galaktozidazės aktyvumo nustatymas: ONPG dažniausiai naudojamas β-galaktozidazės fermento aktyvumui matuoti ir kiekybiškai įvertinti.O-nitrofenolio susidarymo greitis, kuris yra tiesiogiai proporcingas fermento aktyvumui, gali būti matuojamas spektrofotometriškai.

Genų ekspresija ir reguliavimas: ONPG dažnai naudojamas eksperimentuose, susijusiuose su genų ekspresijos ir reguliavimo tyrimais.Jis dažnai naudojamas sulietų baltymų tyrimuose, tokiuose kaip dažniausiai naudojama lacZ sintezės sistema, tiriant genų ekspresiją, kontroliuojant specifinius promotorius.Beta-galaktozidazės aktyvumas, išmatuotas naudojant ONPG, suteikia įžvalgų apie genų ekspresijos lygį.

β-galaktozidazės aktyvumo patikra: ONPG gali būti naudojamas kaip kolorimetrinis atrankos metodas rekombinantinėje DNR technologijoje, siekiant nustatyti LacZ geno, koduojančio β-galaktozidazę, buvimą ir funkcionalumą.Šis atrankos metodas padeda identifikuoti klonus, kuriuose yra dominantis genas.

Fermentų kinetikos tyrimai: ONPG taip pat naudingas tiriant fermento β-galaktozidazės kinetiką.Matuojant fermento-substrato reakcijos greitį esant skirtingoms substrato koncentracijoms, galima nustatyti kinetikos parametrus, tokius kaip Michaelis-Menten konstantos (Km) ir didžiausios reakcijos greitis (Vmax).