Kaip nustatyti optimalią koncentraciją?
Induktoriaus IPTG (izopropil-beta-d-tiogalaktozido) koncentracija didesnė, tuo geriau.Optimali koncentracija priklauso nuo konkrečių eksperimento sąlygų ir norimo indukcijos efekto.
Paprastai IPTG koncentracija naudojama 0,1-1 mM diapazone.Mažesnės koncentracijos gali sumažinti neigiamą poveikį ląstelių augimui ir gali sumažinti citotoksiškumą dėl per didelės tikslinių baltymų ekspresijos.Didesnės koncentracijos gali sukelti per didelę ląstelių metabolinę naštą, paveikti ląstelių augimą ir ekspresijos efektyvumą.
Optimalios koncentracijos nustatymo būdas gali būti tikslinio baltymo ekspresijos lygio įvertinimas, atliekant skirtingų koncentracijų IPTG indukcijos testus.Mažos apimties kultūros bandymai gali būti atliekami naudojant įvairias IPTG koncentracijų diapazonas (pvz., 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM ir tt), o ekspresijos efektas esant skirtingoms koncentracijoms gali būti įvertintas nustatant tikslinio baltymo (pvz., Western) ekspresijos lygį. dėmė arba fluorescencinis aptikimas).Remiantis eksperimento rezultatais, kaip optimali koncentracija buvo parinkta geriausią ekspresijos efektą turinti koncentracija.
Be to, galite remtis atitinkama literatūra arba kitų laboratorijų patirtimi, kad suprastumėte dažniausiai naudojamą IPTG koncentracijos diapazoną panašiomis eksperimentinėmis sąlygomis, o tada optimizuoti ir koreguoti pagal eksperimentinius poreikius.
Svarbu pažymėti, kad optimali koncentracija gali skirtis priklausomai nuo skirtingų ekspresijos sistemų, tikslinių baltymų ir eksperimentinių sąlygų, todėl geriausia optimizuoti kiekvienu konkrečiu atveju.
Paskelbimo laikas: 2023-09-28